Le récessus tubo-tympanique s'étend et forme la caisse du tympan. Les osselets de l'oreille moyenne, qui se sont entre temps différenciés des blastèmes en modèles cartilagineux, sont intégrés dans la caisse tympanique et recouverts d'épithélium endodermique. L'étrier repose sur la fenêtre vestibulaire (foramen ovale, début de la rampe vestibulaire de l'oreille interne). La fenêtre cochléaire (foramen rotundum, extrémité terminale de la rampe tympanique) est fermée par l'épithélium de la caisse tympanique. Cette dernière va plus tard s'étendre aussi dans le rocher et former les cellules mastoïdiennes.
Le conduit auditif externe s'approfondit par prolifération de son ectoderme. Au niveau de la membrane tympanique, l'ectoderme et l'endoderme se retrouvent finalement très proches l'un de l'autre. Ils ne sont séparés que par une mince couche de tissu conjonctif : la couche fibreuse.